蛋白純化方法大全

蛋白純化的技術(shù)很復(fù)雜，以下就會大家熟知蛋白純化步驟。那為什么蛋白質(zhì)要純化呢，去掉蛋白質(zhì)含有的一些雜質(zhì)與其他蛋白質(zhì)一起沉淀。那么又要去除蛋白質(zhì)的雜質(zhì)又要保證蛋白質(zhì)的營養(yǎng)不被流失，于是就要制作不同的方案來應(yīng)對，稱為蛋白純化技術(shù)。根據(jù)蛋白的相似度和差異去除蛋白中的雜質(zhì)！

1、粗分級分離

當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)提取液(有時(shí)還雜有核酸、多糖之類)獲得后，選用一套適當(dāng)?shù)姆椒ǎ瑢⑺牡鞍着c其他雜蛋白分離開來。一般這一步的分離用鹽析、等電點(diǎn)沉淀和有機(jī)溶劑分級分離等方法。這些方法的特點(diǎn)是簡便、處理量大，既能除去大量雜質(zhì)，又能濃縮蛋白溶液。有些蛋白提取液體積較大，又不適于用沉淀或鹽析法濃縮，則可采用超過濾、凝膠過濾、冷凍真空干燥或其他方法進(jìn)行濃縮。

2樣品經(jīng)粗分級分離以后，一般體積較小，雜蛋白大部分已被除去。進(jìn)一步純化，一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。必要時(shí)還可選擇電泳法，包括區(qū)帶電泳、等電點(diǎn)聚焦等作為最后的純化步驟。用于細(xì)分級分離的方法一般規(guī)模較小，但分辨率很高。

3結(jié)晶是蛋白質(zhì)分離純化的最后步驟。盡管結(jié)晶過程并不能保證蛋白一定是均一的，但是只有某種蛋白在溶液中數(shù)量上占有優(yōu)勢時(shí)才能形成結(jié)晶。結(jié)晶過程本身也伴隨著一定程度的純化，而重結(jié)晶又可除去少量夾雜的蛋白。由于結(jié)晶過程中從未發(fā)現(xiàn)過變性蛋白，因此蛋白的結(jié)晶不僅是純度的一個(gè)標(biāo)志，也是斷定制品處于天然狀態(tài)的有力指標(biāo)。

41.機(jī)械破碎法

這種方法是利用機(jī)械力的剪切作用，使細(xì)胞破碎。常用設(shè)備有，高速組織搗碎機(jī)、勻漿器、研缽等。

2.滲透破碎法

這種方法是在低滲條件使細(xì)胞溶脹而破碎。

3.反復(fù)凍融法

生物組織經(jīng)凍結(jié)后，細(xì)胞內(nèi)液結(jié)冰膨脹而使細(xì)胞脹破。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質(zhì)不宜采用此法。

4.超聲波法

使用超聲波震蕩器使細(xì)胞膜上所受張力不均而使細(xì)胞破碎。

以上就是蛋白純化的步驟，給大家了解一下。這項(xiàng)技術(shù)目前在國內(nèi)越來越先進(jìn)，去除蛋白中的雜質(zhì)讓蛋白更純粹。這是一項(xiàng)很復(fù)雜的技術(shù)有興趣的人可以多學(xué)習(xí)，要分離蛋白中的雜質(zhì)還要純化里面的蛋白，要制作出不同的方案，所以這項(xiàng)技術(shù)目前不斷的發(fā)展，未來蛋白純化的技術(shù)會越來越好。